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            種植組培技術
            作者:admin 時間:2021-08-09 15:05:33 瀏覽:23

            由于石斛自然繁殖力極弱,生長緩慢,加之人們掠奪性采挖,資源已嚴重枯竭。而石斛栽培一直未解決其存活率低、進入盛產期年限長等問題,故石斛藥源一直處于緊張狀態。因此,組織培養、遺傳轉化、菌根技術、懸浮培養等生物技術在石斛的應用意義重大,甚為迫切。石斛的組織培養,可用種子、根、莖尖、莖節及葉等為外植體,但以種子進行組培快繁的為多。原球莖的增殖分化是石斛試管苗繁殖的關鍵,因此,研究原球莖增殖分化的適宜培養條件非常重要。特別是應用組織培養技術快速大量繁殖石斛試管苗,是解決其種苗與發展生產的有效途徑。

            鐵皮石斛的組織培養

            鐵皮石斛,又名鐵皮蘭、節草、耳環石斛等。野生鐵皮石斛為國家珍稀瀕危保護植物(三級)。由于其生長環境要求特殊,野生資源已瀕臨滅絕?,F云中雁石斛技術股份有限公司對鐵皮石斛的組培快繁已獲成功,月出苗量50萬瓶以上,為鐵皮石斛工廠化育苗和大面積栽培闖出了一條新路。

            1、 胚培養(種子培養):取人工授粉的鐵皮石斛果實,用75%的乙醇表面消毒,30s后再用0.1%升汞溶液消毒8min,無菌水沖洗4~5次。在無菌操作下,把果實切成0.1mm見方的小塊,接種到培養基上,每瓶3~5塊。研究結果表明,N6培養基對種子萌發和生長最好,蔗糖濃度2%最佳,NAA濃度0.2~0.5mg/L最適合胚的萌發和生長;種子培養中加入椰乳對胚萌發和萌發后的初期生長起促進作用;而香蕉汁對繼代培養中石斛的生根和壯苗起促進作用,生根和壯苗培養中不加入NAA,只用N6+10%香蕉汁,苗長得更粗壯。培養溫度25~28℃,光照強度1600~2000lx,每日10~12h。種子萌發后,轉管3~4次,當幼苗長出4~5片真葉并具有3~4條1~2cm長的根時,可將試管苗進行煉苗后移栽。

            2、莖尖培養:取鐵皮石斛當年萌發的嫩莖尖,用10%次氯酸鈉消毒10min,無菌水沖洗4~5次后接種到培養基上。研究結果表明,培養溫度為25~28℃,光照度1600~2000lx,每日光照10~12h。在MS+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L培養基中培養30天左右,外植體則可誘導出大小不一的白色顆粒狀愈傷組織,再過20天形成不定芽。將愈傷組織和不定芽切割開,再接種到MS+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L中,愈傷組織會增殖并產生不定芽,再將不定芽移到N6+10%香蕉汁中培養30天左右,則會生根長成植株。

            3、幼嫩莖段培養:剪取鐵皮石斛幼嫩莖段,按常規表面滅菌,切成2.0cm左右的切段,每一切段應至少保留1個節,將其接入芽增殖培養基MS+NAA0.1~0.5mg/L+6-BA0.5~2.0mg/L。(蔗糖濃度3.0%,PH5.4~5.8,下各培養基均同)中培養。培養條件:培養溫度(25±2)℃,連續光照培養,光照強度1500lx。培養30~50天后,可在節間處長出1~2個新芽。將新芽切下,再接入芽增殖培養基中繼代培養,經過30天培養,在切口處長出4~6個芽,形成叢生芽簇。將叢生芽切割后,在芽增殖培養基中繼續增殖培養,則可獲得大量叢生芽。將上述叢生芽切割成單苗,轉入壯苗培養基MS(無激素)中培養,40天后,芽可發育成高3.0cm以上并具2~3片葉的健壯無根苗。再將經過壯苗培養的無根苗,轉接到生根培養基1/2MS+IBA0.1mg/L中培養40~60天,在苗基部便可長出多條肉質、綠色氣生根,形成完整植株。

            尚有報道,取鐵皮石斛莖,去葉、洗凈、表面滅菌后,在無菌條件下切成約5mm長的小段,每段必具一個莖節,接種于1/2MS或努森培養基內,置(26±1)℃光照條件下培養,約2周,腋芽長出,約1個月則可形成完整植株。

             4、煉苗與移栽:當試管苗有4~5片葉展開,并具有3~4條1~2cm長的根時,即可揭開瓶蓋,在室內煉苗1周后,將再生植株移植于細土與牛糞(1:2)的栽培基質中,蓋上薄膜,保持濕度90%以上,基質以濕潤、不積水為宜,置通風陰涼處,成活率可達60%?;蛞运榇u4份,碎木炭1份,珍珠巖和蕨根適量組合為移栽基質,其既能透氣,又能排水保水。經研究表明,鐵皮石斛試管苗的出瓶移栽,在4~6月溫度較高、濕度較大時的成活率最高。移栽后的小苗放在陰濕且通風地方,一周內不澆水,以防濕度過大而爛根。以后隨植株生長而加強管理,則可確保鐵皮石斛試管苗的成活。

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